Comparación de métodos de extracción para análisis metabolómico no dirigido en plasma por UHPLC-ESI-QTOF-MS

MENNICKENT, D.; OLIVARES, L.; BUSTAMANTE, L.; MARDONES, C.:
Libro de Resumen del XXXIII Jornadas Chilenas de Química. 147 (2020).

Abstract

El calafate (Berberis microphylla) es una especie vegetal nativa de la familia Berberidaceae ampliamente distribuida en la Patagonia. Su fruto es conocido por ser rico en polifenoles, tales como antocianos, flavonoles y ácidos hidroxicinámicos. Dadas las propiedades benéficas de estos compuestos en el marco salud, se administró un extracto del fruto a ratones normopesos y obesos, con el fin de evaluar su efecto sobre el metabolismo orgánico mediante metabolómica no dirigida en plasma. Previo a ello y considerando que esta estrategia se distingue de una clásica dirigida por su enfoque holístico, es necesario optimizar un tratamiento de muestras no selectivo, con el objetivo de maximizar el número de señales a observar en el análisis. Cada una de estas señales (features) contiene 3 dimensiones: razón masa/carga, tiempo de retención e intensidad, y es representativa de un compuesto químico.

En este contexto, se evaluaron 3 métodos de extracción: uno convencional con MeOH, el método de Folch (fase acuosa: MeOH/H₂O; fase orgánica: CHCl₃) y una extracción en fase sólida con placa Ostro (fase acuosa: ACN; fase orgánica: CHCl₃/MeOH/TEA). Los extractos obtenidos fueron estudiados por UHPLC-ESI-QTOF-MS utilizando una columna C18 (2.1 x 150 mm, 1.7 μm, Kinetex). El análisis de los extractos acuosos se realizó con las fases móviles (A) H₂O 0.1% HCOOH y (B) ACN 0.1% HCOOH y los modos de ionización ESI (+) y ESI (-). El extracto que presentó un mayor número de señales fue el metanólico, con 193/387 (+/-) features. En contraste, los extractos de Folch y con placa Ostro arrojaron 113/183 (+/-) y 93/201 (+/-) features, respectivamente. Por otro lado, el estudio de los extractos orgánicos se realizó con las fases móviles (A) ACN:H₂O 60:40, NH₄HCOO 10 mM, 0.1% HCOOH y (B) IPA:ACN 90:10, NH₄HCOO 10 mM, 0.1% HCOOH y el modo de ionización ESI (+). Al igual que en el caso anterior, el extracto que arrojó más señales fue el metanólico, con 396 features. En contraste, los extractos de Folch y con placa Ostro presentaron 375 y 372 features, respectivamente.

En suma, la extracción convencional con MeOH es la más adecuada para realizar el análisis metabolómico no dirigido en las muestras biológicas de origen murino.