SANHUEZA, M. I.; CASTILLO, R. DEL P.; MELENDREZ, M.; VON PLESSING, C.; NEIRA, J.:
Libro de Resumen del XXXIII Jornadas Chilenas de Química. 77 (2020).
Abstract
CLSM es una técnica ampliamente utilizada en el área de la biología celular, posee grandes ventajas analíticas como por ejemplo, ser una técnica altamente sensible, con alta velocidad de análisis, no destructiva y además entrega imágenes hiperespectrales con excelente resolución espacial y espectral. A pesar de esto, es una técnica infrautilizada en el área farmacéutica donde principalmente se han estudiado características morfológicas y físico-químicas de comprimidos farmacéuticos. El objetivos de este trabajo es evaluar la performance de CLSM, para esto, se realizaron análisis cualitativos y cuantitativos de comprimidos farmacéuticos sólidos sintéticos utilizando métodos multivariados e imágenes hiperespectrales, además se realizaron estudios de confocalidad en planos internos del comprimido. Para la toma de imágenes se utilizó un microscopio confocal espectral Zeiss LSM780 (λex =405 nm) y se obtuvieron espectros de emisión de fluorescencia que fueron analizados a través de técnicas quimiométricas mediante: Resolución Multivariada de Curvas con Mínimos Cuadrados Alternantes (MCR-ALS) para observar distribución y Mínimos Cuadrados Parciales (PLS) para la cuantificación de principios activos (APIs). Se tomaron mapeos químicos (512 μm x 512 μm) desde la superficie hasta 60μm de profundidad en sistemas compuestos por 5 componentes, donde al menos 2 de ellos presentaron fluorescencia y se evidenció un alto nivel de solapamiento de los espectros de emisión. Para la calibración multivariada se utilizaron 25 muestras para generar un set de calibración, este mismo se validó mediante validación cruzada y validación externa para finalmente predecir la concentración de APIs de un set de muestras externo.
MCR-ALS permitió la localización de principios activos y excipientes que mostraron fluorescencia, con modelos que mostraron baja falta de ajuste y altos porcentajes de varianza explicada. PLS mostró altos valores de coeficientes de regresión (r2) entre los valores predichos y esperados (Y fit), además de un bajo error estándar de predicción (>5% w/w). Cifras de mérito fueron calculadas para el modelo de calibración en términos de sensibilidad, sensibilidad analítica, límite de detección y límite de cuantificación. En conclusión, CLSM no sólo puede ser utilizada como técnica de microscopía, sino que además puede ser útil para procesos de control de calidad en la industria farmacéutica donde se requiere no sólo la localización sino también la cuantificación de principios activos fluorescentes.